常做的细胞实验有哪些：配套用途对比

常做的细胞实验有哪些，主流分为细胞培养类、活性检测类、转染与基因操作类、蛋白表征类、迁移侵袭类，细胞复苏、传代、冻存是所有体外细胞研究的基础，MTT、CCK-8多用于细胞增殖与药物毒性筛查，流式细胞术适合批量检测细胞周期、凋亡与表面标志物，划痕实验、Transwell实验分别测细胞迁移、侵袭能力，WB提取细胞内蛋白定量表达水平，免疫荧光定位蛋白在细胞内的位置，PCR从细胞样本扩增核酸，该整套实验组合适合贴壁肿瘤细胞、永生化细胞系，原代分离细胞稳定性偏弱，部分原代细胞难以完成Transwell侵袭检测。

常做的细胞实验：基础培养类

细胞复苏是把液氮保存的细胞快速融化，离心去除冻存保护剂后接种培养瓶，水温控制在37℃，融化全程控制在1分钟内，减少DMSO对细胞膜的损伤。细胞传代在细胞汇合度达到70%至85%时操作，贴壁细胞用胰蛋白酶消化，终止消化后分装到新培养容器，维持细胞处于对数生长期。细胞冻存使用梯度降温方式，冻存液一般为培养基加血清和DMSO，降温速率大约每分钟下降1℃，最后转入液氮长期储存，反复冻存会明显降低细胞存活率。

基础培养是所有后续检测的前置步骤。

常做的细胞实验：活性与凋亡检测类

CCK-8试剂水溶性更好，对比MTT不需要溶解甲瓒结晶，适合高通量药物筛选，读数在酶标仪450nm附近采集。AnnexinV结合细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸，PI标记破损细胞膜，上机前要避免吹打过度造成人为细胞膜破损，人为破损会拉高假阳性凋亡数值。PI染色需要先对细胞进行固定通透，固定后的细胞不再适合后续活细胞功能实验。

常做的细胞实验：功能迁移侵袭类

划痕实验操作门槛低，在铺满细胞的培养板中间用无菌枪头划出笔直划痕，洗去脱落细胞后定时拍照，用软件统计划痕愈合速度，用来评估细胞迁移能力，不适合悬浮细胞。Transwell小室实验分为迁移和侵袭两种，侵袭组小室膜表面预先铺基质胶，细胞穿过薄膜的数量代表侵袭能力，基质胶厚度不均会造成组内数据波动，铺胶时保持冰上低温，防止基质胶提前凝固。

常做的细胞实验：分子表征类

WB即蛋白质免疫印迹，收集细胞沉淀后裂解提取总蛋白，电泳转膜，用特异性抗体识别目标蛋白，既能看蛋白是否表达，也能做相对定量，样本可以冻存备用。免疫荧光在细胞爬片上完成固定通透、封闭、一抗二抗孵育，荧光显微镜下观察蛋白的亚细胞定位，适合看细胞核、细胞膜或者骨架蛋白分布。qPCR提取细胞总RNA反转录成cDNA，扩增目标基因，检测mRNA转录水平，提取RNA全程需要防范RNase污染，不然核酸降解会让Ct值异常偏高。

常做的细胞实验：基因编辑类

细胞转染是把外源质粒、siRNA送入细胞内部，瞬时转染多用于短期敲低或者过表达，稳定转染经过抗性筛选，获得持续表达外源序列的细胞株。慢病毒转染适合难转染的原代细胞，整合进入基因组，相比质粒转染阳性率更高，但是存在基因组插入突变的潜在风险。CRISPR敲除实验周期更长，需要单克隆挑取和基因型鉴定，适合构建基因敲除细胞模型，一般不用于快速初筛。

悬浮细胞不能做划痕、Transwell侵袭实验。

GB/T41740-2022体外哺乳动物细胞毒性试验方法，规定了细胞毒性实验的对照设置、浓度梯度设计和结果判定方式，该标准适用于化学品、医用材料的体外细胞安全评价，不适用于复杂三维类器官模型的毒性判定。