培养基为什么要灭菌后再用|清除原料自带杂菌保证菌种纯培养

培养基为什么要灭菌后再用|清除原料自带杂菌保证菌种纯培养

那次微生物实训偷懒走捷径,跳过规范高压灭菌步骤直接使用配置好的培养液,实打实栽了跟头,也彻底搞懂培养基为什么要灭菌后再用,这从来不是实验室的刻板规矩,是规避实验报废的硬性底线。

当时赶实训进度,手里要做三组菌种培养,看着配好的LB培养基清澈透亮,肉眼看不到半点杂质,就心存了侥幸。觉得只是普通的菌种观察实验,没必要严格按照流程放进高压灭菌锅灭菌二十分钟,只用酒精灯煮沸搅拌了两分钟,就直接分装到培养皿和试管里,想着这点操作足够杀灭里面的脏东西了。

第二天一早进实验室,直接傻眼。

所有未经规范灭菌的培养基全部出了问题,平板表面密密麻麻长满了形态各异的杂菌菌落,有白色絮状的霉菌,还有细碎透明的细菌菌斑,层层叠叠覆盖了整个培养基表面,原本计划接种的目标菌种根本没有生长空间。试管里的液体培养基也变得浑浊黏稠,底部沉淀了大片絮状杂质,和正常澄清的培养液状态完全不一样,整批实验样本彻底报废,前一天一下午的配液、调pH、分装工作全部白费。

一开始还傻傻找错,反复检查超净台消毒情况,重新灼烧接种环、擦拭操作台,甚至怀疑菌种本身被污染,折腾好久才搞明白,所有问题的根源都在没彻底灭菌的培养基上。

培养基的原料本身就自带大量微生物,蛋白胨、酵母膏、琼脂这些常用原料,不是无菌的工业纯品,里面混杂着细菌、真菌还有抗性极强的微生物芽孢。这些微小的菌体和芽孢肉眼完全不可见,混在清澈的培养基里根本分辨不出来,普通煮沸的温度和时长,根本没法彻底杀灭顽固芽孢,只能杀死一部分活性弱的普通细菌。

反正只要培养基里残留一丁点存活的杂菌,后续恒温培养的环境,温度、湿度、营养全部适配,刚好给杂菌提供了绝佳的繁殖条件。短短十几个小时的培养时间,残留的杂菌就会疯狂增殖,抢占全部营养和生长空间,直接压制甚至覆盖人工接种的目标菌种,最后得到的所有实验数据、观察结果都是完全错误的,没有任何参考价值。

同组全程规范灭菌的培养基,培养出来的菌种形态规整、菌落单一,实验结果清晰准确,两相对比,更显得自己的偷懒行为毫无意义。本来十分钟就能规范完成的灭菌步骤,硬生生让整组实验作废,不仅耽误了实训进度,还白白浪费了整套实验耗材。

后来收拾实验台,把一摞长满杂菌的培养皿扔进废液桶,看着浑浊的培养液顺着桶壁流下,就呆呆站在操作台边,没再说话。